Le Laboratoire de référence SIDA VUB – Site Saint-Pierre

Objectif

Confirmer et typer l’infection par le VIH chez les patients ayant eu un résultat de test de dépistage de première ligne réactif dans un laboratoire de biologie clinique. 

Techniques utilisées

Attention : les anticorps maternels restent exceptionnellement détectables jusqu’à l’âge de 18-24 mois. Le diagnostic correct se déroule comme décrit en rubrique Suivi des nouveau-nés de mères séropositives.

Une conclusion est tirée sur la base d’un algorithme incluant les tests suivants :

• VIDAS HIV DUO QUICK ou HIV DUO ULTRA
  • Fabriquant: Biomérieux
  • Type de test: Test IVD, Enzyme Linked Fluorescent Assay (ELFA)
  • Cible: Détection des antigènes et des anticorps VIH

• Geenius HIV 1/2 Confirmatory Assay
  • Fabriquant: Bio-Rad
  • Type de test: Test qualitatif IVD, Test immunochromatographique
  • Cible : Détection et typage des anticorps VIH-1 et VIH-2

• Cobas HIV-1 Test*
  • Fabriquant : Roche Diagnostics
  • Type de test : Test IVD, PCR quantitative VIH-1 (qRT-PCR) avec un intervalle
    de mesure de 20 à 10 000 000 copies/ml
  • Cible : Détermination quantitative de la charge virale VIH-1 dans le sérum* ou le plasma

• Xpert HIV-1 Viral Load*
  • Fabriquant : Cepheid
  • Type de test : Test IVD, PCR quantitative VIH-1 (qRT-PCR) avec un intervalle
    de mesure de 40 à 10 000 000 copies/ml
  • Cible : Détermination quantitative rapide de la charge virale VIH-1 dans le sérum* ou le plasma. Réalisé uniquement en cas d’urgence absolue 

Délai d’obtention du résultat (TAT) après réception de l’échantillon à l’ARL 

• Délai moyen indicatif : 35 heures 
• Délai maximal : 5 jours

Prélèvement sanguin

• Sérum pour lequel un test de dépistage de première ligne s’est avéré réactif
• Tube à sérum de 5 – 10 ml (normal ou SST)
   
• Conserver à température ambiante si acheminement dans les 24 heures
• Réfrigérer à 2-8 °C si le transport ne peut pas être organisé dans la journée

Demandeur

Laboratoire de biologie clinique

* Cette analyse ou matrice spécifique n’est pas couverte par l’accréditation Belac 183-MED.

Objectif

Détection du VIH dans le sang du nouveau-né d’une mère infectée par le VIH. 

La transmission du VIH de la mère à l’enfant (transmission verticale) est très rare en cas de traitement efficace de la mère pendant la grossesse et l’accouchement.

Techniques utilisées

Les techniques sérologiques ne peuvent être utilisées chez les enfants de moins de 18 mois car elles détectent les anticorps maternels. Une éventuelle infection par le VIH est dépistée au moyen de techniques PCR.

• Détection acide nucléique total du VIH–1 (ADN + ARN) Xpert HIV-1 Qual XC *
  • Fabriquant : Cepheid
  • Type de test : Test IVD, RT–PCR qualitative VIH–1
  • Cible : Détection acide nucléique total du VIH–1

• cobas HIV-1 Test*
  • Fabriquant : Roche Diagnostics
  • Type de test : Test IVD, PCR quantitative VIH-1 (qRT-PCR) avec un intervalle
    de mesure de 20 à 10 000 000 copies/ml
  • Cible : Détermination quantitative de la charge virale VIH-1 dans le plasma

• VIH-2

Tous les échantillons pour la détection de l’ADN et de l’ARN du VIH-2 sont envoyés par nos soins au LRS UCL.

Délai d’obtention du résultat (TAT) après réception de l’échantillon à l’ARL STP

• Délai moyen indicatif : 2 jours
• Délai maximal : 7 jours

 VIH-2 : environ 14 à 21 jours (effectué par LRS UCL)

   Prélèvement sanguin

• EDTA 4 ml sans gel, tube pédiatrique
  
  
• Envoyer à température ambiante (max 24 h entre le prélèvement sanguin et la réception à l’ARL STP).

Demandeur

Pédiatre spécialisé en VIH, néonatologue

* Cette analyse ou matrice spécifique n’est pas couverte par l’accréditation Belac 183-MED.

Objectif

Détermination des virions du VIH dans le sang (plasma) ou le liquide céphalo-rachidien (LCR) chez les patients présentant une infection au VIH confirmée, afin de détecter un éventuel échec du traitement.

Technique utilisée

• Cobas HIV-1 Test*
  • Fabriquant : Roche Diagnostics
  • Type de test : Test IVD, PCR quantitative VIH-1 (qRT-PCR) avec un intervalle
    de mesure de 20 à 10 000 000 copies/ml
  • Cible : Détermination quantitative de la charge virale VIH-1 dans le sérum* ou le plasma

• Xpert HIV-1 Viral Load*
  • Fabriquant : Cepheid
  • Type de test : Test IVD, PCR quantitative VIH-1 (qRT-PCR) avec un intervalle
    de mesure de 40 à 10 000 000 copies/ml
  • Cible : Détermination quantitative rapide de la charge virale VIH-1 dans le sérum* ou le plasma. Réalisé uniquement en cas d’urgence absolue 

• VIH-2

Tous les échantillons pour la détermination de la charge virale du VIH-2 sont envoyés par nos soins au LRS UCL.

Délai d’obtention du résultat (TAT) après réception de l’échantillon à l’ARL 

• En moyenne 2 jours
• Maximum 7 jours
• Pour le VIH-2 : environ 14 à 21 jours (effectué par LRS UCL)

Prélèvement sanguin

• EDTA 2 x 7 ml ou 1 x 10 ml sans gel
  
  
• Envoyer à température ambiante (max 24 h entre le prélèvement sanguin et la réception à l’ARL).

Prélèvement de LCR (liquide céphalo-rachidien)

• Minimum 600 µl dans un tube stérile pour liquide de ponction
• Conserver à 2-8 °C pendant maximum 6 jours ou à -20°C ou -80°C au-delà
• Envoyer réfrigéré ou à température ambiante

Demandeur

Infectiologue, pédiatre infectiologue, spécialiste du VIH, interniste, gynécologue

* Cette analyse ou matrice spécifique n’est pas couverte par l’accréditation Belac 183-MED.

Objectif

Détecter la résistance aux médicaments chez les patients atteints du VIH, dans le but de rechercher la cause de l’échec virologique et de prédire la réponse sous traitement antirétroviral.

Technique utilisée

• Détermination de la résistance génotypique PI, NRTI, NNRTI, INI
  • Société : Test in-house
  • Type de test : Séquençage Sanger après RT-PCR nichée (nested PCR)
  • Cible : Détection de mutations dans les codons de résistance des gènes du VIH en relation avec les PI, NRTI, NNRTI, INI (groupes de traitement antirétroviral).

• Détermination du tropisme génotypique*
  • Société : Test in-house
  • Type de test : Séquençage Sanger après RT-PCR nichée (nested PCR)
  • Cible : Prédiction de l’utilisation de corécepteurs (CXCR4 ou CCR5) via la séquence du V3-loop du VIH-1 du gène gp120, en relation avec le traitement par des antagonistes des récepteurs CCR5

• VIH-2

Tous les échantillons pour la détermination de la charge virale et de la résistance génotypique du VIH-2 sont envoyés par nos soins au LRS UCL.

Délai d’obtention du résultat (TAT) après réception de l’échantillon à l’ARL 

• En moyenne 9 jours
• Maximum 21 jours
• VIH-2 : environ 14 à 21 jours (effectué par LRS UCL)

Prélèvement sanguin 

• EDTA 2 x 7 ml ou 1 x 10 ml sans gel
  
  
• Envoyer à température ambiante (max 24 h entre le prélèvement sanguin et la réception à l’ARL).
• En cas d’ajout sur un prélèvement sanguin antérieur pour la charge virale VIH-1 : veuillez mentionner le numéro de demande correspondant sur la prescription!

Prélèvement de LCR (liquide céphalo-rachidien)

• Minimum 600 µl dans un tube stérile pour liquide de ponction
• Conserver à 2-8 °C pendant maximum 6 jours ou à -20°C ou -80°C au-delà
• Envoyer réfrigéré ou à température ambiante

Demandeur

Infectiologue, pédiatre infectiologue, spécialiste du VIH

* Cette analyse ou matrice spécifique n’est pas couverte par l’accréditation Belac 183-MED.

1. Diagnostic du VIH à l’âge de >18 mois : Conserver le sérum à 2-8°C pendant maximum 4 jours ou à -20°C ou -80°C au-delà
2. Diagnostic du VIH chez les nouveau-nés
   
   • • Conserver des aliquots du sang total (EDTA) dans un (micro-) tube stérile adapté au test PCR

   Volume de sang total EDTA disponible	Aliquots à pipeter
   ≥ 800 µl	2x 250 µl
   600-800 µl	1x 250 µl
   400-600 µl	Pas d’aliquots, tout pour plasma et buffy coat
   < 400 µl	Conserver tout, rien à centrifuger

   • Centrifuger le sang total résiduel (EDTA) à 800-1600 g pendant 20 minutes à température ambiante
   • Isoler et conserver le plasma dans un (micro-) tube stérile adapté au test PCR
   • Isoler et conserver le buffy coat (la couche leuco-plaquettaire, cf. figure) dans un (micro-)tube stérile adapté au test PCR
     
     
   • Identifier bien les tubes et conserver à -80°C (ou -20°C)
   • Transport réfrigéré des tubes réfrigérés
     
3. Détermination de la charge virale VIH et la résistance

Isoler et conserver le plasma à partir du sang total résiduel (EDTA) endéans les 24h après la prise de sang

• centrifugation à 800-1600 g pendant 20 minutes à température ambiante
• Prélever et conserver le plasma dans un tube stérile adapté au test PCR

! Attention : ne pas inclure les cellules de la couche leuco-plaquettaire, laisser 1 cm non remué au-dessus dans le tube.

• conserver à -20 °C ou -80 °C (ou 2-8 °C si le test peut être effectué dans les 72 h)
• Transport réfrigéré des tubes réfrigérés

Veuillez contacter l’ARL STP en cas de questions ou si la quantité de sang total disponible pour ces opérations est insuffisante (Tél 02/435 20 61).